激光共聚焦顯微鏡OLS5100技術(shù)簡述

1. 點照明：激光束通過照明針孔，被物鏡聚焦到樣品表面一個極小的點上。

   
   

2. 點探測：從樣品該點反射（或激發(fā)出的熒光）的光信號，再次被物鏡收集，并穿過一個被稱為“共聚焦針孔"的小孔，最終被探測器（如光電倍增管PMT）接收。

   
   

3. 空間濾波：這個共聚焦針孔是關(guān)鍵。只有從樣品焦平面上的點發(fā)出的光，才能恰好聚焦通過針孔被高效探測。而從焦平面上下方（非焦點區(qū)域）發(fā)出的雜散光，則會被針孔阻擋，無法到達(dá)探測器。

   
   

4. 二維成像：通過掃描裝置（通常為振鏡）使激光焦點在樣品表面進行X-Y方向逐點或逐線掃描，同步記錄每個點對應(yīng)的光強信號，即可在計算機上重建出一幅二維的共聚焦圖像。這幅圖像主要反映了樣品焦平面一個薄層的信息，具有較好的對比度和軸向分辨率。

   
   

• 激光光源：提供高強度、單色性好的點光源。常用固態(tài)激光器，波長例如405nm, 473nm, 532nm, 635nm等，不同波長適用于不同樣品材料或熒光染料。

  
  

• 掃描單元：通常采用高速振鏡控制激光束在樣品上的掃描路徑。

  
  

• 共聚焦針孔：一個可調(diào)節(jié)直徑的小孔，用于空間濾波，其大小影響光學(xué)切片厚度和圖像信噪比。

  
  

• 探測器：接收通過針孔的光信號并轉(zhuǎn)換為電信號，如光電倍增管（PMT），具有高靈敏度和快速響應(yīng)特性。

  
  

• 高精度Z軸驅(qū)動：用于實現(xiàn)焦平面的精確步進移動，以獲取Z軸序列圖像。

  
  

• 物鏡：高質(zhì)量物鏡負(fù)責(zé)將激光聚焦到樣品，并收集返回的光信號。其數(shù)值孔徑（NA）直接影響系統(tǒng)分辨率。

  
  

• 控制與圖像處理計算機及軟件：控制整個硬件協(xié)同工作，采集圖像數(shù)據(jù)，并進行三維重建、顯示、測量和分析。

  
  

通過這些技術(shù)的結(jié)合，激光共聚焦顯微鏡OLS5100能夠?qū)崿F(xiàn)比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡更清晰的“光學(xué)切片"成像，并能獲取樣品表面的三維形貌數(shù)據(jù)，為后續(xù)的定量分析奠定基礎(chǔ)。其技術(shù)路徑旨在平衡成像質(zhì)量、測量能力和操作效率。

激光共聚焦顯微鏡OLS5100技術(shù)簡述